Matériels
Rendre les cellules compétentes
Transforme les cellules compétentes avec l’ADN
Récupère les cellules transformées
Dépose et strie les cellules sur la boîte de gélose sélective
Commence l'incubation finale!
2C
Utilise les cellules sur la boucle et strie sur la première ligne, de 1A-1B.
Déverrouille la prochaine boucle propre en cliquant sur la poubelle d’inactivation ci-haut.
2B
3C
1A
2D
3A
3B
2A
1B
3E
3F
Félicitations ! Tu as strié des cellules K12 E. coli sur ta boite de Pétri de gélose LB non sélectives avec succès! Il est temps d’incuber pour faire croître les cellules.
Commence l'incubation
Inverse la boîte de Pétri
Attends!!!!!
Un dernier conseil avant l'incubation…. Tu dois retourner ta boite de Pétri pour que le couvercle soit en bas pour t'assurer que l'humidité flotte vers le haut et maintient la surface de la gélose LB humide. Les cellules aiment l'humidité !
Incube la boîte de Petri inversée
Attends!!!!!
Un dernier conseil avant l'incubation…. Tu dois retourner ta boite de Pétri pour que le couvercle soit en bas pour t'assurer que l'humidité flotte vers le haut et maintient la surface de la gélose LB humide. Les cellules aiment l'humidité!
Succès! Tu as fait croître des cellules « vierges ». Nous les appelons « vierges » parce qu'elles ne sont pas encore modifiées génétiquement. Dans la prochaine section, tu sélectionneras certaines de ces cellules vierges et tu les mélangeras avec une solution tampon spéciale pour créer des cellules « compétentes ». Grâce à cette solution tampon de transformation, les cellules seront capables d'absorber l'ADN pendant l’étape de transformation.
Récupère ton certificat de bio-ingénieur virtuel de niveau 2!
Prochaine étape: créer les cellules compétentes
La DNA Playground a plusieurs réglages pour la température des stations chaudes et froides et pour l'incubateur dont tu as besoin pour modifier et faire croître les cellules!
D'accord
Tu utiliseras les cellules vierges que tu as cultivées par incubation. Rappelle-toi que les colonies bien séparées se développent rapidement et les cellules à croissance rapide absorbent mieux l'ADN!
Parfait!
Les boucles d'inoculation bleues sont des boucles stériles, semblables aux boucles jaunes que tu as utilisé auparavant. La seule différence est que la boucle bleue est plus petite.
Quand la boucle bleue est utilisée pour transférer des liquides, elle peut contenir 1 microlitre (μL) de liquide contrairement à la boucle jaune qui peut contenir 10 μL.
La solution tampon de transformation est faite d'une eau stérilisée mélangée à des sels spéciaux.
Un des principaux sels présent est le chlorure de calcium (CaCl2). Les ions calciums positifs peuvent se lier à l'ADN (qui a une charge négative) pour l'aider à pénétrer dans les cellules.
C’est maintenant le temps de modifier génétiquement tes cellules à l'aide d'une procédure appelée «transformation de colonie». Cette procédure requiert la collecte de colonies de «cellules vierges», l’ajout d’un buffer, puis une «transformation» avec l’ajout d'un plasmide d'ADN. Allume la station froide à 4 °C (Cold Station “Ice/4 °C") afin qu'elle soit bien froide quand tu en auras besoin. Un environnement glacé à 4 °C est fréquemment utilisé en recherche pour maintenir les échantillons stables et pour prévenir leur dégradation.
Place ta solution tampon de transformation sur la station froide afin qu'elle soit froide lorsque tu ajouteras les cellules vierges. Il est très important que les cellules et la solution tampon de transformation restent froides tout au long des prochaines étapes de l’expérience, car la température froide garde les cellules dans un état stable.
Pendant que la solution tampon de transformation refroidit, tu dois recueillir les cellules vierges qui ont incubé sur la boîte de gélose non sélective.
Recueille des cellules vierges de ta boîte de gélose N.S.
Les cellules vierges que tu es sur le point de modifier génétiquement doivent être en période de croissance rapide pour bien absorber l’ADN dans l’étape suivante. Sur ta boîte de Pétri, ce sont les colonies individuelles comme celles dans le cercle rouge qui sont en période de croissance la plus rapide.
Pour l’expérience, tu as besoin de récolter environ 10 petites colonies individuelles. 10 colonies équivaudront à des millions de bactéries en croissance rapide! Cette récolte de colonies individuelles est pourquoi l’étape de striation des cellules vierges avec les 3 boucles est très importante.
Commence la récoltes des cellules en colonies individuelles
Pour s’assurer d’avoir une bonne quantité de cellules, il faut remplir le centre de la boucle bleue de cellules.
Tu dois mettre les cellules dans la solution tampon de transformation qui est FROIDE. Si tu mets les cellules dans une solution tampon de transformation chaude, elles mourront.
Déloge les cellules de la boucle en la tournant vigoureusement dans le tube de solution tampon. Garde le tube au froid; garde le dans la station froide! Tourne la boucle jusqu’à ce que la solution soit trouble (nuageuse) et jusqu’à ce qu'il n'y ait plus de masse ou d’amas de cellules visibles.
Tourne la boucle
J’ai bien mélangé
S'il y a des amas cellulaires, les cellules à l'intérieur des amas ne peuvent pas interagir avec la solution tampon de transformation ni avec l'ADN que tu ajouteras à la prochaine étape. Et si elles n’interagissent pas avec la solution tampon et l’ADN, elles ne peuvent pas être transformées!
C’est une autre raison pourquoi il est important de bien mélanger pendant une expérience scientifique.
Étape suivante: transformer les cellules avec l'ADN
Assure-toi que les cellules en solution restent sur la station froide. Tes cellules sont maintenant capables d'absorber l'ADN. Tu dois passer immédiatement à l'étape de transformation. Cette étape consiste à ajouter l’ADN pour transformer les cellules, ce qui veut aussi dire les modifier génétiquement. Si tu attends plus de deux minutes avant d'ajouter l'ADN, l'efficacité de ta transformation diminuera de beaucoup et c’est bien possible qu’aucune cellule ne soit transformée.
S'il y a des amas cellulaires, les cellules à l'intérieur des amas ne peuvent pas interagir avec la solution tampon de transformation ni avec l'ADN que tu ajouteras à la prochaine étape. Et si elles n’interagissent pas avec la solution tampon et l’ADN, elles ne peuvent pas être transformés!
C’est une autre raison pourquoi il est important de bien mélanger pendant une expérience scientifique.
Récupère ton certificat de bio-ingénieur virtuel de niveau 3!
Materials
Transform Cells
La DNA Playground à des stations froides et chaudes qui peuvent être utilisées pour le choc thermique lors d'une transformation, et un incubateur pour incuber tes cellules vierges et modifiées.
Tous les êtres vivants possèdent un ADN qui indique à leurs cellules comment se développer, quoi produire et comment interagir avec d'autres cellules et avec l'environnement. Puisque l’ADN est un code universel, tu peux aussi l'utiliser pour donner des instructions à des cellules en les modifiant génétiquement. Pour notre expérience, tu utiliseras une molécule d'ADN circulaire appelée plasmide. Cet ADN "programmera" les cellules pour fabriquer un pigment coloré qui provient du corail de l'océan sans toutefois changer l'ADN chromosomique des cellules. J'ai créé ce plasmide d'ADN pour toi afin que tu puisses modifier génétiquement des cellules E. coli pour produire le pigment de corail rouge. Si tu réussis, nous pourrons peut-être faire croître de grandes quantités de vos bactéries et produire de grandes quantités d'encre rouge!
Suivant
Tu utiliseras une boucle d'inoculation bleue pour transférer l'ADN dans le tube de cellules compétentes. Les boucles bleues peuvent contenir 1 microlite (μL) de liquide.
Tes cellules chimiquement compétentes (des cellules qui peuvent absorber l'ADN) devraient encore être froides. Tu vas maintenant insérerez un programme ADN (plasmide) pour modifier leur constitution génétique et entraîner l'« expression » d'un trait.
La station froide est encore allumée et garde tes cellules compétentes froides. Tu dois également utiliser la station chaude à 42 ℃ pour l'étape de choc thermique de la transformation. Un choc thermique se produit lorsque tu modifies la température des cellules du très froid (4 ℃) au très chaud (42 ℃). Ce choc aide à faire entrer l'ADN dans les cellules. Allume la station chaude à 42 ℃ (Hot station “Shock 42")
Trempe la boucle dans l'ADN
Tu dois utiliser la boucle d'inoculation bleue pour obtenir 1 microlitre (μL) de liquide provenant du tube ADN. Ce liquide contient les plasmides ADN. Trempe et tourne la boucle bleue dans le tube d'ADN. Tu pourrais aussi utiliser une pipette pour ajouter 1 uL d’ADN si tu en as une. Comme c’est une de tes premières expériences en génie génétique, c’est plus pratique d’utiliser une boucle.
Tu dois inspecter la boucle pour t'assurer que l'ADN est présent dans la boucle.
Inspecte la boucle
J’ai vérifié
Lorsque tu sors ta boucle du tube d'ADN, vérifie s'il y a du liquide dans le centre de la boucle. Les boucles bleues contiennent 1 µL de liquide. Lorsque tu effectues des recherches scientifiques, tu dois vérifier à plusieurs reprises tes actions pour t'assurer que tout va bien, et que toutes les actions sont faites correctement.
Inspecter la boucle
Plonge la boucle avec l'ADN dans les cellules compétentes, tout en gardant le tube sur la station froide. Fais tourner la boucle pour mélanger l'ADN avec les cellules.
Encore une fois, bien mélanger est une partie importante pour obtenir de bons résultats. Dans ce cas-ci, bien mélanger permet l'incorporation des plasmides d'ADN dans la solution de cellules compétentes afin que les plasmides entrent en contact avec les cellules.
Fais tourner la boucle pour bien mélanger
Twist it
Lorsque tu as terminé de tourner la boucle et de mélanger l’ADN, après environ 10 secondes, jette la boucle dans la poubelle d’inactivation.
Commence l’incubation froide de 5 minutes
Fais incuber les cellules compétentes et l'ADN sur la station froide pendant 5 minutes. Pendant ce temps, l'ADN se lie aux cellules avec l'aide des sels contenus dans la solution tampon de transformation. Une partie des plasmides d'ADN commence maintenant à pénétrer les cellules.
Pendant que le tube est sur la station chaude, l'ADN pénètre de nombreuses cellules. Tu dois ensuite piéger l'ADN à l'intérieur de ces cellules. Pour ce faire, tu vas refroidir les cellules, car, à des températures plus froides, les membranes des cellules deviennent plus rigides, ce qui aide à piéger l'ADN à l'intérieur des cellules. Après 90 secondes sur la station chaude, tu dois maintenant replacer le tube sur la station froide où il doit incuber pendant deux minutes pour bien refroidir les cellules et piéger l'ADN à l’intérieur.
Pour aider à faire croître à nouveau tes cellules, tu utiliseras le support de récupération (Recovery Media). Ce support est composé de LB, un liquide jaune qui contient des sucres, des acides aminés et des minéraux que les cellules E. coli adore. Imagine ton plat préféré; le milieu de récupération, c’est cela pour les bactéries E. coli.
Recover Cells
La station chaude de la DNA Playground est également utilisée pour incuber les cellules E. coli transformées.
D’accord!
Tes cellules K12 E. coli ne sont plus des cellules vierges! En plaçant les cellules dans la solution tampon de transformation avec des plasmides d'ADN et en les soumettant à un choc thermique, tu as inséré un programme ADN, modifiant ainsi leur constitution génétique. Il est temps de les faire croître à nouveau pour voir nos résultats.
Tu dois maintenant aider tes cellules à se développer à nouveau. Elles ont enduré plusieurs changements d’environnement et de température; elles nécessitent un moment de récupération. Pour cette étape de récupération, tu ajoutes une délicieuse nourriture liquide LB, le support de récupération, et tu mélanges et incube le tout.
En ce moment, la station froide et la station chaude 42 ℃ sont allumées. Pour l'étape de récupération, tu dois mettre tes cellules à 37 ℃, une température très confortable pour elles. En fait, 37 ℃ est la température idéale pour la croissance des bactéries E. coli. Change la température de la station chaude de 42 ℃ à 37 ℃ .
Verse le support de récupération
Prochaine étape
Prends ton tube de support de récupération et verse le liquide dans ton tube de cellules transformées.
Le support de récupération contient un liquide LB qui est semblable à la gélose LB que tu as utilisée pour fabriquer la gélose pour les boîtes de Pétri. En fait, la seule différence, c'est qu'il n'y a pas d’agent gélatineux à l’intérieur du liquide LB!
Bravo! Tu as versé le support de récupération dans ton tube contenant les cellules transformées. Tu dois te douter de la prochaine étape… Tu dois bien mélanger. Le mélange est extrêmement important en bio-ingénierie!
La meilleure méthode pour mélanger deux liquides dans le même tube est de retourner le tube sur lui-même 10 fois.
Mélange le tout!
Tu as transformé des cellules vierges avec un plasmide d'ADN qui contient des instructions qui indiquent aux cellules de produire un pigment de couleur rouge. Ensuite, tu as ajouté un support de récupération pour les aider à croître à nouveau. Maintenant, tu dois les laisser croître à 37 ℃ pour une période entre 30 minutes (au minimum) et 24 heures. Ensuite, tu verseras ton tube de cellules sur ta boite de Pétri de gélose LB sélective que tu as fait pendant la première étape. Aide les cellules à bien croître ; fais glisser ton tube sur la station chaude qui est maintenant à 37 °C.
Tes cellules E. coli transformées et récupérées sont maintenant prêtes à être déposé et strié sur la boîte de gélose LB sélective que tu as fabriquée lors de la première étape.
Tu utiliseras maintenant la boîte de gélose LB sélective que tu as faite lors de la première étape.
Tu utiliseras une boucle jaune stérile pour strier les cellules. Dans ce cas-ci, tu stries avec une seule boucle, car le but de la strie est simplement d’étaler le liquide qui contient tes cellules sur la surface entière de la gélose.
Verse tes cellules transformées sur la surface de boite de gélose LB sélective que tu as fait dans la première étape. En général, il suffit de verser environ 100 microlitres (µL) sur la boite, donc tu peux verser la moitié du tube seulement.
Utilise la boucle jaune pour bien étaler les cellules transformées sur la surface entière de la gélose. Tu dois étaler les cellules sur toute la surface, car, contrairement aux cellules vierges où tu avais des millions de cellules prêtes à se développer, après l'étape de récupération suivant une transformation il n'y a que des dizaines ou centaines de cellules transformées prêtes à croître. Faire une seule strie pour bien répartir le liquide sur la surface complète t’aideras à obtenir le plus de cellules possibles. Rappelle-toi que lorsqu'on utilise la méthode des 3 boucles pour faire les stries, le but est de diluer la quantité de cellules.
Récupère ton certificat de bio-ingénieur virtuel de niveau 6!
Prochaine étape: incuber les cellules
Parfait! Tu as fini de répandre les cellules sur la surface entière! Tu dois maintenant passer à la dernière étape, l’incubation finale.
D'accord
Incubate Cells
Tout comme lors de la croissance des cellules vierges, tu utiliseras l'incubateur pour faire croître les cellules transformées.
Ta boite de gélose LB sélective avec tes cellules transformées est prête à être incubée.
Tu es prêt pour la dernière incubation de l’expérience où tu cultives les cellules modifiées génétiquement. Au début, seulement quelques cellules seront présentes, mais au cours de l’incubation, des colonies de bactéries que tu peux voir à l’œil nu apparaîtrons. Rappelle-toi qu'une colonie est une bactérie (cellule) unique qui se développe et se divise en un petit monticule qui contient des millions de bactéries. Tu dois de nouveau retourner la boîte de gélose LB sélective à l’envers avant l’incubation.
Suivant
Inverse la boîte de Pétri
Génial! Au cours des prochaines 24 à 48 heures, les bactéries transformées se développeront. Les cellules transformées se développent plus lentement que les cellules vierges, car elles produisent maintenant des pigments et protéines résistantes aux antibiotiques. Parfois, cela peut prendre jusqu'à 72 heures pour que les couleurs soient vraiment vibrantes!
Regarde les cellules croître
Période accélérée
de 24 heures
Wow!
Tu es maintenant un
héros virtuel du génie génétique!
Tu as modifié génétiquement la bactérie E. coli pour produire un pigment rouge qui provient d'ADN de corail!
Félicitations!
Que peut-on faire d'autres avec le génie génétique?
Que peut-on faire d'autres avec le génie génétique?
Compare les cellules transformées avec les cellules vierges.
Super!
Santé et médecine
Medical
Le diabète est une condition médicale qui est souvent traitée avec de l'insuline, mais d'où vient cette insuline? Jusque dans les années 1970, l'insuline était prélevée dans le pancréas de porcs et de chevaux morts. Les organes étaient séchés puis broyés, et l'insuline (produite naturellement dans le pancréas) était isolée et injectée aux patients. Ce processus a aidé de nombreuses personnes à contrôler leur diabète, mais a également entraîné des réactions allergiques et des échantillons d'insuline impurs.
Mais dans les années 1970, les scientifiques ont identifié et isolé l'extrait d'ADN qui code pour l'insuline humaine! Ils ont mis cet extrait dans un plasmide, transformé ce plasmide en une cellule bactérienne, puis l'ont mis en culture - comme tu as fait dans cette simulation. Le microbe modifié produisait une insuline humaine sûre : Humulin. En 2006, environ 150 000,00 flacons d'insuline ont été produits pour des millions de patients. De nombreux médicaments d'aujourd'hui sont produits avec ces techniques de bio-ingénierie. Les bactéries et les cellules de levure sont cultivées dans de grands bioréacteurs pour produire de l'insuline améliorée, plusieurs thérapies contre le cancer et d'autres médicaments.
En savoir plus sur l’ADN:
What is DNA? simulator (lien en anglais)
En savoir plus sur l’art biologique:
Canvas Kit simulator (lien en anglais)
Apprends quelque chose de nouveau:
Continue ton voyage génétique...
Fais la version pratique de cette expérience! (lien en anglais)
Teste tes compétences en génie génétique avec un quiz! (lien en anglais)
Obtiens ton certificat finale!
Obtiens ton certificat finale!
Fais la version pratique de cette expérience! (lien en anglais)
Teste tes compétences en génie génétique avec un quiz! (lien en anglais)
En savoir plus sur l’ADN:
What is DNA? simulator (lien en anglais)
En savoir plus sur l’art biologique:
Canvas Kit simulator (lien en anglais)
Allons-y!
La bio-ingénierie aide les particuliers et les industries à fabriquer plusieurs produits, dont des encres, des colorants et des pigments de manière durable, et ce, à partir de sources qui étaient impossibles auparavant grâce à l’utilisation de code d'ADN. Et si on pouvait fabriquer un meilleur pigment ROUGE grâce à la bio-ingénierie?!
Aujourd'hui, c'est à toi de modifier génétiquement des bactéries avec un code d’ADN qui peut produire un pigment rouge naturel et durable. Les instructions pour produire le pigment rouge proviennent en fait du code ADN d'un corail rouge!
Durant l'exercice, tu obtiendras un tube d'ADN qu’une amie à préparé pour toi. Cet ADN est en fait une chaîne circulaire d'ADN appelé plasmide que ton amie a développé à partir d'un minuscule échantillon de corail. Lorsque tu inséreras le plasmide dans les bactéries, les bactéries «liront» le code ADN et produiront ensuite la protéine qui donne la couleur rouge. Au cours de la croissance des bactéries, le pigment durable rouge apparaîtra et pourra éventuellement être utilisé comme encre ou colorant !
Nous avons besoin d'un pigment ROUGE qui respecte de l'environnement !
Aujourd'hui, la plupart des pigments et des colorants sont fabriqués à l'aide de la chimie industrielle. Cela signifie beaucoup de chaleur, d'énergie et, dans de nombreux cas, un impact significatif sur l'environnement et la santé des personnes qui les créent et les utilisent.
Aliments
Les plantes peuvent également être modifiées par génie biologique. Plusieurs cultures vivrières ont été conçues pour produire des variétés plus riches en nutriments, résistantes à la sécheresse ou aux ravageurs. Pour créer des plantes, un plasmide d'ADN est modifié pour exprimer une fonction spécifique, telle que la production de vitamines. L'ADN est transformé en une cellule bactérienne, comme vous l'avez fait dans cette simulation. La plante est ensuite mélangée avec cette bactérie transformée et dans des conditions spéciales, l'ADN de la cellule bactérienne entrera dans les cellules végétales. La plante peut alors fabriquer la vitamine ou tout ce que le programme ADN dicte.
Les premières plantes transgéniques ont été développées dans les années 1980. Il s'agissait de plants de tabac résistants aux antibiotiques. Aujourd'hui, des millions de personnes dépendent chaque jour des aliments génétiquement modifiés, mais la technologie reste controversée et les gens sont préoccupés par la sécurité des aliments en termes de santé humaine et de l'écosystème de notre planète.
Matériaux
Jusqu'à récemment, la seule façon de fabriquer des plastiques était de les produire à partir de combustibles fossiles. Mais de nos jours, la biologie peut être utilisée pour fabriquer des matériaux comme certains bioplastiques et bio caoutchoucs. Les bactéries et les cellules de levure ont été conçues avec de l'ADN qui peut construire de petites molécules de carbone à l'intérieur des cellules. Ces molécules de carbone sont les éléments constitutifs qui peuvent être reliés entre eux pour fabriquer des bioplastiques et des bio caoutchoucs.
Medical
Quand on pense à l'énergie, on pense souvent au charbon, panneaux solaires, ou aux centrales nucléaires. Cependant, ces dernières années, des organismes vivants ont été utilisés pour générer de l'énergie, généralement sous forme de combustibles liquides. Les bactéries, les levures et les algues sont conçues avec un nouvel ADN pour produire des composés riches en énergie: des essai pour produire une molécule semblable à l'essence, le butanol, dans les bactéries sont en cours. L'éthanol peut être produit dans des cellules de levure pour être utilisé dans les véhicules et les algues sont conçues pour produire du kérosène, un composant du carburéacteur. Les chercheurs conçoivent également des bactéries pour produire directement de l'électricité. Recherche les piles à combustible microbiennes pour en savoir plus.
Énergie
Tu as touché l'extrémité de la boucle!!! Maintenant, elle n’est plus stérile et il y a probablement des micro-organismes dessus. Obtiens une nouvelle boucle et sois prudent la prochaine fois.
Agar Powder
Obtenir une nouvelle boucle
Antibiotics
Grow Blank Cells
Un plasmide est un petit morceau circulaire d’ADN. Un plasmide a généralement un ou plusieurs gènes qui sont les instructions pour transformer la cellule. Le plasmide est un peu comme une clé USB que tu insères dans ta cellule. Tu ajoutes des instructions sans nuire au bon fonctionnement de la cellule.
Dans notre cas, le plasmide possède un gène de résistance aux antibiotiques que l’on a ajouté (pour faire la sélection) et un gène de création de pigment rouge.
Merci pour le plasmide d’ADN!
< Plasmide
En apprendre plus sur l'ADN (lien en anglais)
Objectif: deviens un héros du génie génétique!Découvre les concepts fondamentaux du génie génétique et de la création de
bactéries génétiquement modifiées
Conseils1. Cliques sur tous les objets, il peut y avoir des informations cachées!
2. Pose tes questions techniques help@amino.bio
3. N'oublie pas d'imprimer tes certificats virtuels de bio-ingénieur!
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édition
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Bienvenue au Bio-ingénieur Virtuel!
Créons de l’encre rouge!
Comment cela marche-t-il?
Regarde sur le côté gauche de l’écran. Tu peux voir les sept étapes à suivre pour transformer les bactéries en «micro-usines» à pigment rouge.
Pour commencer, tu en apprendras plus sur la nourriture et les «maisons» dans lesquelles on cultive des bactéries (1. Préparer des boîtes de Pétri avec de la gélose LB). Ensuite, tu apprendras à faire des stries de bactéries sur la gélose pour les faire croître (2. Cultiver des cellules vierges). Puis, tu utiliseras la chimie pour rendre tes cellules capables d'absorber l'ADN (3. Créer les cellules compétentes) et ensuite pour les modifier génétiquement (4. Transformer les cellules).
Finalement, tu devras aider tes cellules modifiées à récupérer à l’aide d'une nourriture liquide à bactéries (5. Récupérer les cellules), puis les déposer et strier sur une boite de Pétri (6. Déposer et strier les cellules) afin de les faire croître dans l’incubateur (7. Incuber les cellules). Après ces étapes, tu obtiendras des bactéries génétiquement modifiées qui produisent un pigment!
La station chaude te permet d'incuber des tubes à des températures chaudes. Dans un laboratoire, tu utilises peut-être un bain d'eau chaude et un thermomètre à la place.
Incubateur (incubator)
Ceci est ton panneau de contrôle pour utiliser les différentes stations de la DNA Playground!
L'incubateur est un «petit four» sur le côté de la DNA Playground qui peut contenir deux boîtes de Pétri (DNA Playground Home) ou huit boîtes de Pétri (DNA Playground Large). L'incubateur peut maintenir la bonne température pour incuber les cellules d'E. coli et les cellules de levure.
L’écran (Touchscreen)
La station froide maintient les tubes froids. Dans un laboratoire, tu utilises peut-être de la glace dans un seau à glace à la place.
D'accord, parfait!
Station froide (Cold station)
Station chaude (Hot Station)
Je suis prêt à démarrez la simulation Engineer-it!
Sac Jour 1 (Day 1):
Poudre de gélose lb (LB agar powder),
Antibiotique (Antibiotic),
Cellules vierges (Blank cells)
Boucles d’inoculation jaunes et bleues
(Yellow and blue inoculation loops)
Le kit Engineer-it est livré avec tous les ingrédients nécessaires pour compléter ta première activité de génie génétique. Cela comprend la culture et l'ingénierie des cellules et l'inactivation (élimination) en toute sécurité des déchets expérimentaux.
Le kit contient les éléments suivants que tu découvriras au cours de la simulation:
Sac Jour 2 (Day 2):
Solution tampon de transformation (T. buffer),
Support de récupération (Recovery media),
ADN (DNA),
Cellules (+) ((+) cells)
Commençons l'expérience!
50 mL d'eau stérilisée (Sterile water)
4x boîtes de Pétri (Petri dishes)
Pochoir pour strier (Streaking stencil)
Sac à inactivation (Inactivation bag)
Antibiotiques (Antibiotics)
Microwave
Four micro-ondes (Microwave)
Poudre de gélose LB
(LB Agar Powder)
Gants en nitrile (Nitrile Gloves)
Eau stérilisée (Sterile Water)
N'oublie pas de cliquer sur les différents objets. Il peut y avoir des informations cachées!
Commence par préparer les boîtes de Pétri de gélose LB
Boîtes de Petri (Pétri dishes)
Super trouvaille! Bon clic!
Fait amusant:
Savais-tu que, malgré la croyance populaire, seuls trois types de bactéries E. coli sur des centaines de types différents d'E. coli sont pathogènes ? En fait, tu as déjà des E. coli dans ton gros intestin et ils aident à digérer les aliments et à maintenir la santé intestinale.
Le K12 E. coli est une souche de laboratoire d'E. coli qui n'est pas dangereuse et qui est utilisée par les scientifiques depuis plus de 100 ans!
D’accord!
Commençons par une introduction rapide aux outils que tu utiliseras dans cette simulation de Bio-ingénieur Virtuel.
Tu utiliseras un Kit Engineer-it qui contient tout le matériel dont tu as besoin (cellules, ADN, etc.) et une DNA Playground, un équipement de laboratoire pour l'incubation et l'ingénierie des cellules.
Découvre la DNA Playground
Il est important d'utiliser de l'eau stérilisée quand on fait de la bio-ingénierie, car s'il y a d'autres micro-organismes dans l'eau, ils peuvent aussi se développer lors de l’incubation, ce qui contaminerait l'expérience.
Le LB est la source de nourriture pour les bactéries. La gélose LB est semblable à de la gelée ou gélatine du dessert “Jell-O”.
Cette consistance gélatineuse permet de faire grandir des bactéries sur sa surface. Le LB contient du sucre (glucose), de la tryptone (acides aminés) et des extraits de levure.
Les boîtes de Pétri sont les récipients dans lesquels tu verse la gélose fondue sur laquelle tu fais ensuite croître les bactéries.
Pour cette expérience, tu verseras deux types de gélose LB fondue dans les boîtes, la gélose LB sélective et non sélective.
Des antibiotiques sont ajoutés à la gélose LB fondue pour la rendre «sélective».
Tu auras besoin d’une boîte de Pétri avec gélose LB sélective pour cultiver les bactéries modifiées génétiquement. Au cours de cette expérience, tu découvriras pourquoi!
D'accord!
Lors de la bio-ingénierie, tu dois porter des gants (latex, nitrile) afin de te protéger de tes expériences et de protéger tes expériences de toi!
Tu as besoin d'un four micro-ondes pour faire bouillir l'eau stérilisée. Faire bouillir l'eau stérilisée aide à garantir que la poudre de gélose LB se dissoudra complètement dans l'eau.
Mets tes gants en nitrile violets. Tu dois porter des gants pour te protéger de tes expériences et pour protéger tes expériences de toi!
Tout d'abord, il est très important d'identifier les boîtes Pétri lors d'une expérience. Utilise le marqueur et identifie tes boîtes de Pétri avec le type de gélose que tu vas verser à l’intérieur. Si tu travailles dans un endroit communautaire, tu dois aussi identifier à qui les boîtes appartiennent en inscrivant ton nom ou tes initiales.
N’oublie jamais cette étape ; c'est un principe de base de biosécurité très important.
Tu dois identifier les boîtes de Pétri sur la section du bas (la base). De cette façon, si le couvercle tombe, la partie qui contient la gélose LB sera encore bien identifiée.
Au cours de cette simulation, tu utiliseras deux de ces boîtes Pétri: la boîte N.S. et la boîte S.(e). Le Kit Engineer-it contient assez de gélose pour faire 2 autres boîtes de Pétri, les boîtes S. (-), S(+). Découvre pourquoi en cliquant sur les boîtes!
Tu es maintenant prêt à faire tes boîtes de Pétri avec la gélose LB.
Remplissons les boîtes de Pétri de gélose LB
La gélose LB est à la fois la nourriture que les bactéries mangent et la structure sur laquelle elles se développent. La gélose LB est similaire au dessert de gélatine "Jell-O". Si cela peut t'aider, imagines que tu fabriques de la gélatine Jell-O pour bactéries!
Clique et fait glisser l'eau stérilisée dans le micro-ondes pour la faire bouillir.
(attention à l'eau chaude)
La poudre de gélose LB se dissout à ~80 °C, donc l'eau doit bouillir afin de bien la dissoudre. Démarre le four micro-ondes.
Prochaine étape
Parfait! L'eau bout!
Retourne au micro-ondes un peu plus longtemps
Ton eau n'est pas encore bouillante! Tu dois voir une ébullition continue ou la gélose LB ne se dissoudra pas!
La poudre de gélose LB ressemble à la poudre Jell-O, mais elle est plus nutritive. Elle contient des sucres, des acides aminés et des minéraux dont les bactéries ont besoin pour se développer. Clique sur le tube de poudre LB et verse-la dans l'eau bouillante.
cliquez pour tourbillonner!
Parfait! C’est maintenant le temps d’agiter la solution pour bien mélanger. Quand la solution est bien mélangée, elle sera jaune pâle et transparente (ni opaque, ni nuageuse).
Agite la gélose LB pour que toute la poudre se dissoudre dans l'eau stérilisée afin de créer la « gélose LB fondue ».
Verse la boîte de Pétri non sélective
Tu as maintenant de la gélose LB fondue. Si tu as fait le kit Canvas, tu te rappelleras avoir ajouté des antibiotiques à l'étape suivante.
Aujourd'hui, dans le kit Engineer-it, tu dois d'abord verser une boîte de Pétri « non sélective » avant d'ajouter les antibiotiques.
Tu dois maintenant ajouter la capsule antibiotique à ta gélose fondue pour créer de la gélose sélective et t'assurer que seules les bactéries modifiées se développeront sur ces boîtes de Pétri. C'est ce qu'on appelle la sélection, ou faire une boîte de Pétri sélective.
Fais glisser la capsule dans la gélose LB fondue et agite doucement jusqu'à ce que l'intérieur de la capsule se dissout.
Une fois la capsule antibiotique dissoute, tu verseras la gélose LB fondue dans les trois boîtes de Pétri restantes afin que chaque boite soit à moitié pleine. Ensuite, remets le couvercle aux 3/4 et laisse la gélose refroidir et se solidifier. Tu utiliseras une boîte de Pétri sélective (S.) pour faire croître tes bactéries modifiées génétiquement.
Verse la gélose LB sélective fondue dans les boîtes de Pétri.
Prochaine boîte de Pétri
Met le couvercle
Tu as terminé avec la première étape, bravo ! Tu as fabriqué des boîtes de Pétri de gélose LB que tu utiliseras pour modifier génétiquement des cellules. À la prochaine étape, tu feras grandir tes cellules vierges sur la boîte N.S.
Prochaine étape: cultiver les cellules vierges
Obtiens ton certificat de bio-ingénieur virtuel de niveau 1!
Pour la boîte de Pétri non sélective, tu veux verser la gélose au «fond» de boîte de Pétri (pas dans le couvercle!) et la remplir seulement à moitié. Comme tu verras, cette boîte de Pétri sera extrêmement importante pour la croissance des cellules vierges.
Vas-y, verse la gélose dans la boîte de Pétri!
Mettre le couvercle sur les 3/4 du chemin
pour permettre à l’agar de refroidir
Pour la boîte de Pétri non sélective, tu veux verser la gélose au «fond» de boîte de Pétri (pas le couvercle!) et la remplir seulement à moitié. Comme tu verras, cette boîte de Pétri sera extrêmement importante pour la croissance des cellules vierges.
Vas-y, verse la gélose dans la boîte de Pétri!
Suivant!
Tu as terminé avec la première étape, bravo ! Tu as fabriqué des boites de Pétri de gélose LB que tu utiliseras pour modifier génétiquement des cellules. À la prochaine étape, tu fera grandir tes cellules vierges.
Les boîtes de Pétri non sélectives ne contiennent aucun antibiotique. Par conséquent, elles ne sélectionnent aucun trait spécifique. Ces boîtes de Pétri contiennent simplement le milieu de croissance (nourriture LB) que les bactéries adorent et qui leur permettra de se développer.
Prochaine étape: Cultiver les cellules vierges
Obtiens ton certificat de bio-ingénieur virtuel de niveau 1 !
Les boîtes de Pétri sélectives contiennent des antibiotiques. Celles-ci sont appelées boîtes de Pétri sélectives, car elles t'aident à SÉLECTIONNER tes bactéries MODIFIÉES GÉNÉTIQUEMENT. L'ADN avec lequel tu vas créer tes bactéries contient un gène pour rendre les bactéries colorées, ainsi qu'un gène pour rendre la cellule résistante à l'antibiotique spécifique que tu as ajouté à la gélose LB fondue. En rendant tes cellules résistantes à un antibiotique particulier, les cellules modifiées génétiquement sont les seules à pouvoir se développer dans la boîte de Pétri sélective; les bactéries non modifiées (vierges) meurent. Ne t'inquiète pas, l'antibiotique avec lequel tu rends la bactérie résistante n'est plus utilisé en médecine/hôpitaux.
Les boîtes de Pétri non sélectives ne contiennent aucun antibiotique. Par conséquent, elles ne sélectionnent aucun trait spécifique. Ces boîtes de Pétri contiennent simplement le milieu de croissance (nourriture LB) que les bactéries adorent et qui leur permettra de se développer.
Strie les cellules vierges sur la boîte de gélose non sélective
Boîte de Pétri non sélective (Non-selective plate)
Cellules vierges (Blank cells)
Boucle d’inoculation jaunes (Yellow inoculation loops)
DNA Playground
La DNA Playground a différents réglages pour la température et l’incubation. Tu en auras besoin pour modifier génétiquement et faire croître tes cellules!
Boucle d’inoculation jaunes (Yellow loops)
Une boucle d'inoculation stérile est utilisée pour toucher certaines cellules que tu as reçues et les étaler sur la gélose LB. Fais attention pour ne pas toucher l'extrémité de la boucle. Tu la contaminerais!
Les bactéries de laboratoire, également appelées cellules, peuvent être maintenues en vie de plusieurs manières. Les cellules bactériennes avec lesquelles tu travailles ici sont fournies inoculé dans un tube de gélose LB molle. Les cellules bactériennes ainsi cultivées peuvent vivre plusieurs mois. À l'aide d'une boucle d'inoculation, tu vas transférer quelques cellules du tube sur une boîte de Pétri afin d'amplifier la quantité pour les modifier génétiquement plus tard. Les E. coli de laboratoire (Escherichia coli) ne sont pas les mêmes que les E. coli que tu associes aux mauvais hamburgers et aux infections. Les E. coli de laboratoires ne rendent pas malades les personnes en bonne santé. En fait, les humains ont beaucoup d'E. coli non-nocifs dans leurs intestins pour aider à la digestion des aliments et à la création de vitamines et d'acides aminés! Pour cette expérience, tu utiliseras une souche d'E. coli bien étudiée, non-pathogène (non-nocive) appelée K12. Presque tous les laboratoires de recherche et de biotechnologie dans le monde ont utilisé une version de cette souche durant leurs recherches.
Strier les cellules vierges sur la boîte de gélose non sélective
D’accord
Tu as fait un excellent travail en fabriquant ta boîte de Pétri de gélose LB non sélective. Il est maintenant temps de l'utiliser! Assure-toi de saisir la boîte de Pétri NON sélective lorsque tu cultives des cellules « vierges ».
Tu as touché l'extrémité de la boucle d'inoculation stérile!!! Maintenant, il y a probablement des micro-organismes dessus. Obtiens une nouvelle boucle et sois plus prudent la prochaine fois.
Commence par allumer ton incubateur (incubator) à 37 ℃ pour qu'il soit à la bonne température quand tu en auras besoin.
Ton incubateur peut prendre jusqu'à 30 minutes avant d'atteindre la température désirée. Tu peux mettre tes boites de Pétri à l'intérieur même si la température n'est pas à 37 °C. Alors, tu peux déjà commencer à strier les cellules vierges sur ta boîte Pétri N.S.
Strie les cellules
L'E. coli K12 vit habituellement dans les intestins des animaux et pour cette raison, aime la température corporelle ! Il faudra une journée supplémentaire pour les faire croître à 30 ℃. Mieux vaut mettre l'incubateur à 37 ℃.
Tu veux gaspiller de l'électricité!?? La Station froide utilise 40W d'électricité, alors pourquoi l'allumer quand tu n'en as pas besoin?
Allume l'incubateur à 37 ℃.
Tu veux gaspiller de l'électricité!?? La Station froide utilise 40W d'électricité, alors pourquoi l'allumer quand tu n'en as pas besoin? Allume l'incubateur à 37 ℃.
Oups! D'accord
L' E. coli K12 vit dans les intestins des animaux et aime la température corporelle ! Une température de 42 ℃ équivaut à une fièvre dans un corps humain - et la fièvre qui est conçue pour tuer les microbes et créer un stress vis-à-vis de leur survie!
Allume l'incubateur à 37℃.
Le kit Engineer-it est livré avec un tube qui contient une culture vivante de cellules E. coli de laboratoire vierges. Tu dois prendre de ces cellules et les transmettre sur une boîte de Pétri de gélose LB afin de les faire croître. Pour ce faire, tu utiliseras une boucle jaune stérile.
Commence par tremper la boucle jaune stérile dans le tube de cellules d'E. coli vierges afin de récolter des cellules.
Trempe la boucle dans le tube de cellules
Whoa! Tu as seulement besoin de tremper la boucle une seule fois!
Il suffit de toucher la surface de gélose avec la boucle, car il y a énormément de cellules à l’intérieur. S’il y a de la gélose sur ta boucle après avoir plongé la boucle, ce n'est pas grave.
D’accord!
Ouvre la boîte de Pétri de gélose LB non sélective ouverte et, strie la surface de la gélose avec ta boucle jaune qui est maintenant recouverte des cellules vierges provenant du tube.
Next Step
Si tu as bien trempé la boucle dans le tube de cellules, la boucle aura l'air moite et brillante lorsque vous la regarderez à la lumière. Si elle a l'air sèche, plonge-la à nouveau dans le tube!
Whoa down there, you only need to dip once! Really, you only need to touch the surface of the LB agar stab because there are lots of cells there. If you get some jelly-like LB agar on your loop too, it is OK.
J'essaie!
Tu dois strier (frotter) les cellules sur la gélose afin de cultiver des colonies de bactéries. Une colonie est une bactérie unique qui se développe et se divise en petit monticule qui contient des millions de bactéries identiques. Il y a trois étapes à suivre pour bien strier: 1) Trace une première ligne près du rebord de la boîte avec ta boucle jaune qui est maintenant recouverte de bactéries E coli. Pour tracer la ligne, fais glisser la boucle sur la surface de la gélose. Puis jette la boucle dans la poubelle d'inactivation à l’aide d'un clic sur la poubelle.
2) À l’aide d'une nouvelle boucle stérile jaune, fais glisser la boucle à travers la première ligne pour recueillir un peu de bactéries et fais un petit zig-zag de haut and bas. Jette la boucle en cliquant sur la poubelle d’inactivation.
3) Avec une troisième boucle stérile, fais maintenant glisser la boucle à travers le deuxième zig-zag et continue en un autre zig-zag. Jette la boucle dans la poubelle d'inactivation.
Voilà! C’est à ton tour d’essayer...
Oups! obtenir une nouvelle boucle
Tu as touché l'extrémité de la boucle !!! Les micro-organismes environnementaux qui sont sur tes gants sont probablement maintenant sur la boucle. Obtiens une nouvelle boucle et sois prudent la prochaine fois.
Utilise la deuxième en boucle et strie sur la deuxième ligne, de 2A-2D. La ligne 1 a BEAUCOUP de cellules. En faisant glisser une boucle propre à travers la première ligne, tu obtiendras moins de cellules sur la ligne 2. C'est un peu comme une dilution de la quantité de cellules. Quand tu as terminé, jette la boucle en cliquant sur la poubelle d’inactivation.
Utilise la dernière boucle et stries les cellules sur la troisième ligne, de 3A-3F.
Cette ligne contient encore moins de bactéries et contiendra des colonies bactériennes isolées. Des colonies isolées apparaissent lorsqu'une seule bactérie se divise plusieurs fois pour former un monticule. C'est de ces colonies dont tu as besoin à la prochaine étape.
Jette la boucle avec un clic sur la poubelle d'inactivation quand tu as fini de tracer la troisième ligne.
Recouvre avec la chambre humide
Fais glisser la palette en dessous
Place ta boîte de Pétri striée sur la palette à incubateur. La palette t'aidera à insérer les boîtes de Pétri dans la DNA Playground. C’est un peu comme une planche à pizza!
Ta boîte de Pétri est sur la palette et est maintenant recouverte par la chambre humide. Elle est donc prête à être insérée dans la DNA Playground!
Insère dans la DNA Playground
Insère la boîte de Pétri!
Presque là...
Ouvre l'incubateur!
Presque fini!
Ferme l’incubateur
Laisse les cellules croître pendant 12 à 24 heures!
Cette partie de l'expérience exige que tu abaisses la température des cellules pour les maintenir stables! Allume la station froide à 4 °C.
Bon travail! Pendant que cette station refroidit, tu peux prendre le tube de solution tampon de transformation (T. Buffer) et le mettre dans la station froide pour bien refroidir la solution.
Prends le tube de solution tampon de transformation
Refroidir à 16 °C n'est pas tout à fait suffisant pour garder tes cellules stables tout en les rendant compétentes. Allume plutôt le 4 °C. Une température de 16 °C est fréquemment utilisée en génie génétique pour ligaturer l'ADN (le coller ensemble).
7. Incuber les cellules
Tu n'as pas besoin de l’incubateur pour l'instant!
Allume la station froide afin de rendre tes cellules compétentes sans les tuer.
Tu n'as pas besoin de la station chaude pour le moment. Tu dois refroidir tes cellules et la solution tampon, tu ne dois pas les chauffer! Allume la station froide à 4 °C.
Tu n'as pas besoin de la station chaude pour le moment. Tu dois refroidir tes cellules et la solution tampon, tu ne dois pas les chauffer! Allume la station froide à 4 °C.
N'éteins pas la station froide! Tes cellules se réchaufferont trop tôt et le reste de ton expérience ne fonctionnera pas très bien.
Garde-les au froid jusqu'à ce que tu sois prêt à faire le choc thermique.
Refroidir à 16 °C n'est pas tout à fait suffisant pour garder tes cellules compétentes stables. Laisse la station froide à 4 °C. Le 16 °C est souvent utilisé en génie génétique pour ligaturer l'ADN (le coller ensemble).
Cette partie de l'expérience exige que tu abaisses la température pour maintenir les cellules stables! Allume la station froide à 4 °C.
Tu dois changer la température de la station chaude pour qu’elle soit à 42 °C, tu n’as pas besoin d'allumer l’incubateur pour l'instant.
Allume la station chaude. Tu utiliseras l'incubateur plus tard.
Tu dois changer la température de la station chaude pour qu’elle soit à 42 °C, tu n’as pas besoin d'allumer l’incubateur pour l'instant.
Allume la station chaude. Tu utiliseras l'incubateur plus tard.
Tu dois changer la température de la station chaude pour qu’elle soit à 42 °C, tu n’as pas besoin d'allumer l’incubateur pour l'instant.
Allume la station chaude. Tu utiliseras l'incubateur plus tard.
Tu dois changer la température à 42 °C pour faire un choc thermique, non pas à 30 °C!
Tu dois changer la température à 42 °C pour faire un choc thermique, non pas à 37 °C! Tu utiliseras le 37 °C pendant l'étape de récupération.
Les stations de ta DNA Playground atteignent maintenant les températures nécessaires pour cette partie de l’expérience. Tu peux commencer la transformation: ajoute l'ADN à tes cellules compétentes pendant que la station chaude réchauffe.
Commence la transformation des cellules compétentes
Maintenant que de nombreux plasmides d'ADN sont liés à de nombreuses cellules, tu dois « choquer » à la chaleur les cellules. En chauffant les cellules du 4 ℃ au 42 ℃, la membrane des cellules devient plus fluide et l'ADN est donc plus facilement capable de traverser la membrane cellulaire. Cette procédure s’appelle un choc thermique. Fais glisser le tube de cellules et d'ADN de la station froide à la station chaude qui est déjà 42 ℃.
Récupère ton certificat de bio-ingénieur virtuel de niveau 4!
Après deux minutes, les cellules sont à nouveau froides et les membranes bien rigides. Tu as réussi à piéger de nombreuses copies de ton plasmide d'ADN dans de nombreuses cellules! Bravo!
Les cellules commencent maintenant à «exécuter» les programmes d'ADN contenu dans le plasmide. Il est donc temps de récupérer nos cellules pour les aider à survivre suite à la transformation.
Prochaine étape: récupérer les cellules
Tu dois mettre la température de la station chaude à 37 °C, pas à 30 °C !
Oups! D'accord
Tu dois maintenant aider tes cellules à se développer à nouveau. Elles ont enduré plusieurs changements d’environnement et de température, alors elles nécessitent un moment de récupération. Pour cette étape de récupération, tu ajoutes une délicieuse nourriture liquide LB, le support de récupération, et tu mélanges et incube le tout.
En ce moment, la station froide et la station chaude 42 ℃ sont allumées. Pour l'étape de récupération, tu dois mettre tes cellules à 37 ℃, une température très confortable pour elles. En fait, 37 ℃ est la température idéale pour la croissance des bactéries E. coli. Change la température de la station chaude de 42 ℃ à 37 ℃ .
Aide tes cellules à récupérer
Génial! La station chaude se refroidira pour atteindre 37 °C. Si tu termines l'étape de récupération rapidement et que la station n’est pas encore exactement à 37 °C, tu peux tout de même placer le tube ici, car il refroidira la station rapidement et cela n'endommagera pas les cellules.
Pas besoin d'appuyer sur le bouton Shock 42 °C. Tu dois plutôt appuyer directement sur le bouton "Heat 37 °C" pour allumer la station chaude à 37 °C.
Génial! Maintenant, les cellules incuberont à 37 °C. Pendant cette période, les cellules vont croître et se diviser, y compris les cellules que tu as modifiées avec le plasmide d’ADN. À l'étape suivante, tu verseras le tout sur la boîte de Pétri de gélose LB sélective. Comme la gélose est sélective, seulement les cellules modifiées seront capable de croître. Tu n'as plus besoin de la station froide. Tu peux l'éteindre.
Éteint la station froide
Récupère ton certificat de bio-ingénieur virtuel de niveau 5!
Bon travail!
Prochaine étape: déposer et strier les cellules
Commence par allumer ton incubateur à 37 ℃ pour qu'il soit à la bonne température quand tu en auras besoin.
Prépare la boîte de Pétri pour l'incubation
Excellent, au cours de la prochaine heure, ton incubateur chauffera lentement jusqu'à la température optimale pour l'incubation de tes cellules modifiées.
Ok
Oups, tu as allumé l'incubateur à 42 °C! C'est un peu chaud pour récupérer les cellules. Allume l'incubateur à 37 °C.
Tes cellules pourraient aussi croître à 30 °C, mais pas aussi bien que si elles étaient à 37 °C. Puisque tu veux mettre toutes les chances de ton côté durant ton expérience, mettre l'incubateur à 37 °C est un meilleur choix.
Recouvre avec la chambre humide
Place ta boîte de Pétri sur la palette à incubateur. La palette t’aidera encore une fois à insérer les boîtes de Pétri dans la DNA Playground.
Insère dans la DNA Playground
La boîte de Pétri avec tes cellules modifiées génétiquement est sur la palette et elle est maintenant recouverte par la chambre humide. Elle est prête à être insérée dans la DNA Playground pour l’incubation finale!
Ouvre l'incubateur!
Presque fini...
Laisse les cellules se développer 24 heures...
La gélose LB est à la fois la nourriture que les bactéries mangent et la structure sur laquelle elles se développent. La gélose LB est similaire au Jell-O. Si cela peut t'aider, imagines que tu fabriques du Jell-O à bactéries!
Clique et fait glisser l'eau stérilisée dans le micro-ondes pour la faire bouillir.
Oups! Ceci sont les commandes de la station chaude du DNA Playground. La station chaude sert à chauffer les tubes et est située sur le dessus du minilab.
Tu veux allumer l'incubateur à 37 ℃. Les incubateurs sont conçus spécialement pour incuber des boîtes de Pétri.
Tu as touché l’extrémité de la boucle!!! Maintenant, elle n’est plus stérile; il y a probablement des micro-organismes provenant de tes gants sur la boucle. Obtiens une nouvelle boucle et sois prudent la prochaine fois.
Tu dois changer la température de la station chaude à 37 °C, tu n’as pas besoin de changer la température de la station froide.
Tu dois changer la température de la station chaude à 37 °C, tu n’as pas besoin d'allumer l’incubateur.
Tu dois changer la température de la station chaude à 37 °C, tu n’as pas besoin d'allumer l’incubateur.
Pas besoin d'appuyer sur le bouton “Ice" 4 °C, la station froide doit rester allumé pour garder les cellules froides. Tu dois plutôt allumer la station chaude à 37 °C.
Ah! D'accord
Tu dois toujours identifier les boîtes de Pétri sur la partie du bas. De cette façon, si le couvercle tombe, la partie qui contient la gélose LB sera toujours étiquetée. Dans cette expérience, tu utiliseras seulement 2 boîtes Pétri: la boîte N.S. et la boîte S.(e). Le Kit Engineer-it contient asser de gélose pour faire 2 autres boîte de Pétri, les boîtes S. (-), S(+). Apprends-en plus en cliquant sur chaque boîte!
Tu es maintenant prêt à faire tes boîtes de Pétri avec la gélose LB.
Les boîtes de Pétri identifiées avec un “S.” sont des boîtes Pétri Sélectives.
Les boîtes sélectives contiennent des antibiotiques mélangés dans la gélose. Celles-ci sont appelées boîtes de Pétri sélectives, car elles t'aident à SÉLECTIONNER tes bactéries MODIFIÉES GÉNÉTIQUEMENT. L'ADN avec lequel tu vas créer tes bactéries contient un gène pour rendre les bactéries colorées, ainsi qu'un gène pour rendre la cellule résistante à l'antibiotique spécifique que tu as ajouté à la gélose LB fondue. En rendant tes cellules résistantes à un antibiotique particulier, les cellules modifiées génétiquement sont les seules à pouvoir se développer dans la boîte de Pétri sélective ; les bactéries non modifiées (vierges) meurent. Ne t'inquiète pas, l'antibiotique avec lequel tu rends la bactérie résistante n'est plus utilisé en médecine/hôpitaux.
La boîte Pétri S. (e) contient de la gélose avec antibiotique et est préparée afin que tu déposes le résultat de ton expérience à l’intérieur. Donc S. pour sélective et “e.” pour “expérimentale”
La boîte Pétri S. (-) contient de la gélose avec antibiotique et est préparée pour créer un contrôle négatif. C’est-à-dire une boîte Pétri sur laquelle le résultat sera négatif si tout se passe bien, donc rien ne devrait apparaître après une période d’incubation. Dans le Kit Engineer-it, tu utiliserais cette boîte pour vérifier si la sélection antibiotique fonctionne en striant des bactéries non modifiées (cellules vierges). Comme les bactéries ne sont pas modifiées, elles ne sont pas résistantes à l’antibiotique et devraient mourir en sa présence. Si elles poussent durant l’incubation, cela t'indiquera que la gélose n’a pas ou n’a pas assez d’antibiotiques.
La boîte Pétri S. (+) contient de la gélose avec antibiotique et est préparée pour créer un contrôle positif. C’est-à-dire une boîte Pétri sur laquelle le résultat sera positif si tout marche bien, donc une croissance bactérienne devrait apparaître après une période d’incubation. Dans le Kit Engineer-it, tu utiliserais cette boîte pour incuber des bactéries déjà modifiées en laboratoire, pour vérifier si tes boîtes Pétri et ton incubation fonctionne comme prévu.
Tu peux en apprendre plus en regardant le manuel instruction du Engineer-it Kit sur le site www.amino.bio!
Les boîtes de Pétri identifiées avec un “N.S.” sont des boîtes Pétri Non Sélectives.
Les boîtes de Pétri non sélectives ne contiennent aucun antibiotique. Par conséquent, elles ne sélectionnent aucun trait spécifique. Ces boîtes de Pétri contiennent simplement le milieu de croissance (nourriture LB) que les bactéries adorent et qui leur permettra de se développer.
Dernière boîte de Pétri
Les boîtes sont prêtes!
Parfois, en ajoutant de la poudre froide à de l'eau chaude, il se peut que tu aies à chauffer la solution un peu plus longtemps afin que l'eau soit de nouveau suffisamment chaude pour dissoudre la poudre. Donc, après avoir ajouté la poudre de gélose LB à l'eau, c'est une bonne idée de retourner la solution au micro-ondes pour 4 secondes de plus.
Démarre le micro-ondes pour t’assurer que l’eau soit assez chaude pour dissoudre la poudre de gélose LB.